更新时间：2023-06-25 23:20
释义
DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。
特点:不含RNase(RNasefree)，可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNaseI失活所需的EDTA。
用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA聚合酶(RNA Polymerases)催化的RNA转录后去除DNA模板;DNaseI足迹实验(DNaseIfootprinting)研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片断文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
来源:从牛胰腺纯化得到。
分子量:约32kDa(单体)。
活性定义:37℃10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNaseI失活。酚氯仿抽提也可以使DNaseI失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNaseI有显著抑制作用。
此外，在对染色质进行低DNaseI处理，可发现酶切割将先发生在少数特异性位点上，这些特异性位点叫做DNaseI超敏感位点（DNaseI Hypersensitive Sites，DHSs ），它实际上是一段长约200bp的DNA序列特异暴露的染色质区域，甲基化程度较低，富含HMG14,HMG17蛋白，一般在转录起始附近或者相关部位。